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基因擴增PCR儀與傳統儀器的區別分享

發布時間:2022-10-10瀏覽:28次

   PCR(聚合酶鏈式反應)是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,再調溫度至DNA聚合酶適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。
 
  基因擴增PCR儀的本質是體外核酸擴增,加熱使雙鏈DNA解開螺旋,在退火溫度條件下引物同模板DNA雜交,在TaqDNA聚合酶,dNTPs,Mg2+和合適pH緩沖液存在條件下延伸引物,重復“變性→退火→引物延伸”過程至25~40個循環,呈指數級擴大待測樣本中的核酸拷貝數。PCR擴增時加入的引物利用熒光素進行標記,使引物和熒光探針同時與模板進行特異性結合,擴增結果通過熒光信號采集系統實時采集信號并輸送到計算機分析處理系統,實時輸出量化結果。
 
  傳統儀器只能夠定性地分析是否存在目標片段。但是價格要低很多,而且運行成本也要低很多。不過不能直接得到擴增結果,還需要做電泳檢測。實際中檢測遺傳疾病,品種分子標記篩選,甚至親自鑒定等都可以由它完成。
 
  但是,某些需要定量的實驗就必須用到實時定量PCR了。比如檢測某些病原物的數量(血液乙肝病毒復制程度),特定基因的表達量(比如結合反轉錄做的RNA定量分析),某些基因在染色體組中拷貝數(以前往往使用southern blot技術)等等?;驍U增PCR儀一般不需要對擴增產物進行電泳分析,操作相對簡單些,但是耗材實在是貴。簡單來說,看有沒有用傳統儀器,看有多少用熒光定量PCR。傳統儀器只能擴增,不能檢測,便宜?;驍U增PCR儀除了擴增,還能在擴增的同時檢測DNA發出的熒光信號,試劑和儀器都更貴。

 

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